表达肺孢子菌p55多表位串联基因腺病毒重组载体的构建

• 作者: 何丽 安春丽 张尔夫 薛婷
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肺孢子菌 p55基因 腺病毒载体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R382.3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建携带肺孢子菌p55多表位串联基因(p55TAG)的腺病毒重组载体,鉴定其在真核细胞HEK293中的表达情况.方法 将人工合成的p55TAG目的片段与腺病毒载体(pHBAd-EF1-MCS-GFP)连接后转化到DH5α大肠杆菌感受态中,经Amp抗性筛选得到重组载体pHBAd-p55TAG,将重组载体与腺病毒骨架质粒pBHGlox (delta) E1,3 Cre共转染HEK293细胞,通过绿色荧光蛋白(GFP)验证转染结果,收集包装成功的病毒进行PCR扩增,扩增产物测序验证,用Western blot检测病毒在感染细胞后的目的蛋白表达情况.结果 构建的pHBAd-p55TAG腺病毒重组载体转染HEK293细胞后检测到绿色荧光蛋白表达,包装好的病毒PCR扩增产物测序结果与原始序列一致,Western blot检测结果显示在60 kDa处有成功表达目的条带.结论 本研究成功构建了表达肺孢子菌p55多表位串联基因的腺病毒重组载体,并验证其能在真核细胞中有效表达.构建的载体为进一步研究抗肺孢子菌感染疫苗奠定了基础.