肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析

• 作者: 刘彤 安春丽 栾和芝 王雪莲 赵雨杰
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肺孢子菌 p55蛋白 嵌合基因 重组融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 774-777,786
• 分类号: R382.3
• 字数: 3822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.09.002

摘要

目的 构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物.方法 自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定.pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST.表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功.SDSPAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000.Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST.结论 成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵雨杰	中国医科大学基础医学院生物芯片中心	62	231	8.0	10.0
2	王雪莲	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	58	258	7.0	15.0
3	安春丽	中国医科大学基础医学院病原生物学教研室	85	506	11.0	18.0
4	刘彤	中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室	27	172	7.0	12.0
5	栾和芝	秦皇岛港口医院检验科	1	3	1.0	1.0