草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体制备及其特异性分析

• 作者: 冯茹 曾伟伟 汤亚方 王庆 王承宝 王英英 石存斌 高辉
• 来源期刊: 淡水渔业
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 VP6蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 页码范围: 9-14
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 5406字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-6907.2018.01.002

摘要

为了制备高效的草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型VP6蛋白多克隆抗体并对其特异性进行鉴定,实验以草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型HZ08株为模板,采用PCR方法扩增S9基因,将该S9基因与pET-32a( +)载体连接构建pET-32a-S9原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3) 后用IPTG诱导表达;纯化后的重组VP6蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,使用间接ELISA方法测定抗体效价,Western blot和IFA试验鉴定抗VP6蛋白多克隆抗体特异性.结果显示草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型的S9基因在原核表达载体中能够正确地表达VP6蛋白,纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备的抗VP6多克隆抗体,经间接ELISA方法测定其效价约为1:105, Western blot和IFA试验结果显示制备的多克隆抗体能特异性识别GCRVⅡ型毒株,而不能识别GCRV I型、Ⅲ型以及其它病毒,表明该多克隆抗体具有较高的特异性.研究表明制备的抗VP6蛋白多克隆抗体能够特异性识别GCRV Ⅱ型病毒,为GCRV Ⅱ型病原学研究及草鱼出血病临床诊断奠定基础.