寨卡病毒E蛋白及第三结构域的原核表达和多克隆抗体制备

• 作者: 丁晨曦 叶福强 朱旭辉 潘秀珍 王长军 胡丹 艾乐乐 谭伟龙 郭晓璐 陈家锋
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 寨卡病毒 E蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-28
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 字数: 4501字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2018.00.002

摘要

目的 在大肠杆菌中克隆表达和纯化寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)包膜糖蛋白(Envelope Protein,E)及第三结构域(Envelope DomainⅢ,EDⅢ),并制备两种免疫原的鼠多克隆抗体.方法 通过Vero-E6细胞培养扩增ZIKV,提取病毒总RNA并反转录为cDNA,利用E和EDⅢ基因的cDNA序列构建原核表达载体pET32a/E和pET28a/EDⅢ,转入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni-柱亲和层析法纯化蛋白.以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清,间接ELISA法测定效价,Western Blot检测特异性.结果 成功表达并纯化重组蛋白E和EDⅢ,获得的多克隆抗体效价均达到1∶409 600,Western Blot检测多克隆抗体可特异性识别重组E蛋白和EDⅢ以及天然E蛋白.结论 成功制备出特异性抗寨卡病毒E蛋白和EDⅢ的鼠源多克隆抗体,为深入探索寨卡病毒致病机制、检测方法和免疫策略奠定了研究基础.