降钙素原的原核表达及鉴定

• 作者: 吴胜昔 曾政 李令臣 李俊萱 李志 梁望旺 王玲玲 蒋棚俊
• 来源期刊: 重庆理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 降钙素原 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 药学·医学
• 页码范围: 134-138
• 页数: 5页
• 分类号: R725
• 字数: 2442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8425(z).2018.06.021

摘要

为了实现降钙素原(PCT)蛋白在大肠杆菌中高效表达,对PCT的编码基因序列进行优化,通过化学方法合成优化后PCT基因,并将其克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/PCT,转化到大肠杆菌BL21 (DE3)感受细胞中.将IPTG作为诱导剂诱导重组蛋白的表达,利用His-tag镍柱纯化PCT重组蛋白,并对纯化后的PCT重组蛋白进行SDS-PAGE电泳分析以及Western blot鉴定.结果表明:当重组菌株的诱导条件为0.5 mMIPTG 25 ℃诱导12 h时,PCT蛋白表达量最高.SDS-PAGE 电泳显示:纯化所得PCT蛋白纯度达到了90%以上.Western blot显示:在17KD处有明显的蛋白印迹条带,与预期相符.说明成功实现了在大肠杆菌中高效表达PCT蛋白,为后续开展PCT单抗的制备以及检测方法的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾政		48	178	8.0	11.0
2	吴胜昔	重庆理工大学药学与生物工程学院	22	38	3.0	4.0
3	王玲玲	重庆理工大学药学与生物工程学院	4	5	2.0	2.0
4	梁望旺		11	19	3.0	3.0
5	蒋棚俊	重庆理工大学药学与生物工程学院	1	3	1.0	1.0
6	李令臣	重庆理工大学药学与生物工程学院	2	3	1.0	1.0
7	李俊萱	重庆理工大学药学与生物工程学院	2	3	1.0	1.0
8	李志	重庆理工大学药学与生物工程学院	2	3	1.0	1.0