多拷贝脂肪酶基因在黑曲霉中表达研究

• 作者: 刘天奇 张会 张贺 徐玥 李杰 王欣 黄超群
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脂肪酶 多拷贝 分泌表达 黑曲霉
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 49-58
• 页数: 10页
• 分类号: Q815
• 字数: 4858字
• 语种: 中文

摘要

文章在使用含6个glaA box强启动子PglaA6R和高效分泌信号肽SglaA调控黑曲霉脂肪酶基因AnlipA表达基础上,用pyrG双向筛选标记,应用多拷贝黑曲霉脂肪酶基因策略,构建含1个拷贝AnlipA基因表达载体pSZHA6R-AnlipA和含2个拷贝AnlipA基因表达载体pSZHA6R-2AnlipA,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462(△pyrG△asAA∷pyrG),获得asAA基因位点整合纯合同源重组转化子CICC2462 (pSZHA6R-AnlipA)和CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA).重组菌株经摇瓶发酵后,作荧光定量PCR、SDS-PAGE和脂肪酶活力检测.结果表明,重组菌株可分泌表达约37.0 ku目的蛋白条带,CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)中脂肪酶表达在mRNA水平和酶活水平皆高于CICC2462 (pSZHA6R-AnlipA).发酵第5天CICC2462 (pSZHA6R-2AnlipA)中AnlipA基因转录水平为CICC2462(pSZHA6R-AnlipA) 1.26倍.二者酶活力在发酵第8天达峰值,此时CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)是CICC2462(pSZHA6R-AnlipA) 1.32倍,酶活力达1 480 U·mL-1.对重组菌株CICC2462(pSZHA6R-2AnlipA)第8天发酵液作酶学性质分析,结果表明,最适温度为35℃,最适pH为6.0.获得1株高效分泌表达脂肪酶食品级黑曲霉工程菌.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	张贺	东北农业大学生命科学学院	55	321	11.0	14.0
3	王欣	东北农业大学生命科学学院	15	71	5.0	8.0
4	张会	东北农业大学生命科学学院	9	42	3.0	6.0
5	刘天奇	东北农业大学生命科学学院	4	3	1.0	1.0
6	黄超群	东北农业大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0
7	徐玥	东北农业大学生命科学学院	1	3	1.0	1.0