果胶酶基因剂量效应与水解果胶的工艺研究

• 作者: 彭小波 杨江科 陈光军
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 果胶酶 基因拷贝数 荧光定量PCR 分泌表达 水解工艺
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 开发与应用
• 页码范围: 170-177
• 页数: 8页
• 分类号: Q815
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.02.0030

摘要

[目的]实现烟曲霉果胶酶AFPG基因在毕赤酵母表达并获得高产菌株;阐述果胶酶AFPG的基因剂量效应;探究果胶的水解工艺.[方法]采用PCR技术从烟曲霉扩增AFPG基因并克隆到pAO815载体;用同尾酶构建多拷贝串联表达盒,经线性化的质粒电转到毕赤酵母构建重组工程菌;采用实时荧光定量PCR检测AFPG基因拷贝数;用薄层层析(TLC)技术对果胶的酶解产物进行分析.[结果] SDS PAGE分析表明AFPG基因表达了一个约40 kDa的蛋白;拷贝数为2、3、5的重组子摇瓶发酵,蛋白含量分别为0.24 mg/mL 、0.28 mg/mL 、0.35 mg/mL;14 L高密度发酵比活为8783 U/mg;该酶最适温度和pH为70℃和5.0;在底物浓度0.7％ (W/V) ,酶量20 U,水解果胶30 min,转化率达到12％.[结论]果胶酶AFPG的表达存在基因剂量效应,5拷贝是2拷贝表达量的1.5倍,可通过构建多拷贝获得高产菌株.果胶酶解效果明显,水解工艺研究为果胶酶的应用奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨江科		19	40	4.0	5.0
2	彭小波		1	0	0.0	0.0
3	陈光军		1	0	0.0	0.0