慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF的构建及鉴定

• 作者: 纪晴 蔡艺煌 许铭炎 邓小玲 黄文霞 黄洁
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒载体 质粒构建 血清反应因子 口腔鳞癌细胞
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 234-238
• 页数: 5页
• 分类号: R735.35
• 字数: 3518字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.014

摘要

目的:构建敲减人血清反应因子SRF基因的慢病毒质粒,为进一步研究SRF在口腔鳞状细胞癌中的作用提供工具.方法:利用Therimo Fisher公司RNAi网站设计出针对SR基因特异性敲减的片段,然后通过对pLKO.1载体进行双酶切,胶回收纯化后,经T4连接酶将双酶切线性化载体与设计的目的片段进行连接,转化和质粒提取,采用双酶切以及测序的方法对重组质粒进行序列鉴定.利用293T细胞对构建正确的pLKO.1-hSRF质粒进行病毒包装后感染SAS口腔鳞癌细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定株,并通过Western blot和实时荧光定量PCR对稳定转染细胞株的敲减效率进行验证.结果:构建出的慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF经测序和酶切鉴定均正确,感染该慢病毒质粒的SAS细胞后,其SRF蛋白表达量和mRNA水平与对照组相比均显著下降(P＜0.01).结论:慢病毒敲减质粒pLKO.1-hSRF构建成功,获得SRF低表达的SAS细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄洁	厦门大学医学院基础部	55	77	5.0	6.0
2	邓小玲	厦门大学医学院基础部	10	7	2.0	2.0