ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定

• 作者: 华佳 吴进 曲雪菲 蒋鹏 龚爱华
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 酸敏感离子通道3 干扰质粒 慢病毒 疼痛
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 检验医学
• 页码范围: 58-61,66
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y180214

摘要

目的:构建酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channels 3,ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定.方法:利用GenBank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4 DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko.1-Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3-shRNA组和EGFP-shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达.结果:合成的ASIC3干扰序列成功连接至Pl-ko.1-Puro载体;qRT-PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3-shRNA质粒构建成功;qRT-PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP-shRNA组相比,ASIC3-shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P<0.05).病毒滴度约为1×109 IU/mL.结论:ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋鹏	江苏大学附属医院麻醉科	35	184	8.0	12.0
2	龚爱华	江苏大学医学院	77	261	10.0	13.0
3	吴进	江苏大学附属医院麻醉科	28	92	6.0	8.0
4	华佳	江苏大学附属医院麻醉科	11	52	4.0	7.0
5	曲雪菲	江苏大学医学院	1	0	0.0	0.0