猪瘟病毒非结构蛋白NS3和NS5B多克隆抗体的制备和鉴定

• 作者: 侯金秀 周斌 张云娜 李照耀 胡峰 郑阳 陈熊男
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 非结构蛋白3(NS3) NS5B 原核表达 多克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 1093-1099
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201804005

摘要

[目的]本试验旨在制备特异性鼠抗猪瘟病毒(CSFV)非结构蛋白NS3和NS5B的多克隆抗体.[方法]根据CSFVNS5B基因序列设计1对特异性引物,以CSFV石门株为模板PCR扩增NSSB基因,同时根据大肠杆菌对密码子的偏嗜性优化了NS3密码子,并将NS3和NS5B基因分别克隆至原核表达载体pColdI,转化至大肠杆菌Rossetta 2 (R2),经0.1mmol·L-1 IPTG诱导后进行融合蛋白的表达和纯化,常规免疫BALB/c小鼠制备抗血清.应用Western blot和间接免疫荧光技术鉴定了多克隆抗体的特异性.[结果] Western blot结果显示,该抗血清不仅能识别原核和真核表达的NS3和NS5B蛋白,也能识别细胞中感染的CSFV并产生特异性条带;间接免疫荧光检测结果表明,2种抗血清除均能与胞浆中的CSFV粒子发生反应外,也能识别宿主细胞中真核表达的NS3和NS5B蛋白.[结论]本试验成功表达了NS3和NS5B,且用其制备的抗血清具有生物学功能,为深入探究猪瘟病毒致病机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周斌	南京农业大学动物医学院	62	792	17.0	26.0
2	胡峰		11	18	3.0	4.0
3	郑阳	南京农业大学动物医学院	2	7	2.0	2.0
4	侯金秀	南京农业大学动物医学院	2	3	1.0	1.0
5	李照耀	南京农业大学动物医学院	3	6	2.0	2.0
6	陈熊男	南京农业大学动物医学院	1	3	1.0	1.0
7	张云娜	南京农业大学动物医学院	1	3	1.0	1.0