mTIGIT-mLumin跨膜融合蛋白慢病毒载体和真核表达载体的构建及体外的稳定表达

• 作者: 刘霞 李欣悦 杨鑫鑫 王娟 王小铃 王晶哲 王荟 邵启祥 闫美娜
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: TIGIT mLumin 重组质粒 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 200-204
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3312字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y180051

摘要

目的:构建以mLumin荧光蛋白为指示系统的小鼠T细胞免疫球蛋白和结构域蛋白(mouse T cell Ig and ITIM domin,mTIGIT)胞外区真核表达载体,并表达mTIGIT-mLumin融合蛋白.方法:分别设计mTIGIT和mLumin的特异性引物,通过PCR技术扩增两个目的基因序列,经酶切、连接,克隆至plenti-puro和pcDNA3.1载体.将构建的plenti-puro-mTIGIT-mLumin慢病毒载体进行病毒包装并感染HEK-293T细胞,而pcDNA3.1-mTIGIT-mLumin真核表达质粒转染非洲绿猴肾成纤维Cos7细胞,利用两种表达载体的药物抗性进行筛选感染或转染的细胞,检测融合蛋白的表达情况.结果:通过PCR顺利扩增获得mTIGIT和mLumin,经酶切、连接插入至载体,基因测序结果证实克隆的mTIGIT和mLumin片段序列正确,并成功正确插入到plenti-puro载体和pcDNA3.1载体中;荧光显微镜和共聚焦显微镜观察显示,转染的HEK-293T细胞和Cos7细胞经过筛选能够稳定表达mTIGIT-mLumin融合蛋白.结论:成功构建plenti-puro-mTIGIT-mLumin慢病毒载体和pcDNA3.1-mTIGIT-mLumin真核表达载体,且能够在目的细胞中稳定表达mTIGIT-mLumin融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵启祥	江苏大学医学院	78	336	9.0	14.0
2	王娟	江苏大学医学院	54	332	9.0	16.0
3	刘霞	江苏大学医学院	10	29	3.0	5.0
4	李欣悦	江苏大学医学院	2	1	1.0	1.0
5	王荟	江苏大学医学院	7	2	1.0	1.0
6	闫美娜	江苏大学医学院	2	0	0.0	0.0
7	王晶哲	江苏大学医学院	1	0	0.0	0.0
8	王小铃	江苏大学医学院	1	0	0.0	0.0
9	杨鑫鑫	江苏大学医学院	1	0	0.0	0.0