人铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的融合表达与纯化

• 作者: 刘凌志 刘晓阳 张惟材 李彤 汪建华 熊向华 田威
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 人铜锌超氧化物歧化酶 麦芽糖结合蛋白 融合表达 纯化
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 604-608
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.05.004

摘要

目的:在大肠杆菌中表达并纯化人铜锌超氧化物歧化酶(HuSOD1).方法:合成HuSOD1编码基因,PCR扩增后连入pMAL-p5x质粒构建融合表达载体,转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态,IPTG诱导表达,NBT法测定HuSOD1酶活,利用麦芽糖结合蛋白亲和层析柱纯化MBP-HuSOD1融合蛋白,经因子Xa酶切及分子筛柱层析纯化HuSOD1蛋白.结果:构建了pMAL-p5x-HuSOD1表达载体,在大肠杆菌中实现了高表达,目的蛋白占全菌蛋白的30％,其中可溶性表达占63％,具有超氧化物歧化酶活性;通过亲和层析纯化得到纯度大于95％的融合蛋白MBP-HuSOD1,经因子Xa酶切后纯化得到纯度约90％的HuSOD1蛋白.结论:在大肠杆菌中表达并纯化获得有活性的MBP-HuSOD1,经进一步酶切、纯化后得到HuSOD1.