寨卡病毒囊膜E蛋白的原核表达及其抗体制备

• 作者: 刘党生 刘波 吴军 巩新 王佳美
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 寨卡病毒 E蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 218-222
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 3359字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.02.012

摘要

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中重组表达寨卡病毒(ZIKV)囊膜(E)蛋白的200个氨基酸(138～338)截短片段ZIKV-E200,制备其多克隆抗体,为寨卡病毒亚单位疫苗后续研究提供检测抗体.方法:用全基因序列合成方法合成寨卡病毒E蛋白全长基因,以该基因为模板,用PCR方法克隆ZIKV-E200基因片段,经EcoR Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后连接到pET22b载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,获得重组质粒pET22b-ZIKV-E200,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞得到重组表达菌株pET22b-ZIKV-E200.将37℃诱导表达后的菌液超声波破碎处理后制备ZIKV-E200蛋白,将制备的抗原ZIKV-E200免疫BALB/c小鼠,经3次免疫后,采集血清制备其相应的多克隆抗体,采用Western印迹检测多克隆抗体的特异性.结果:获得ZIKV-E200基因片段,并构建了其相应的原核表达载体pET22b-ZIKV-E200,在大肠杆菌中表达了重组ZIKV-E200蛋白,其相对分子质量约为25 000,与理论值一致;用分离的蛋白ZIKV-E200免疫小鼠后获得了抗ZIKV-E蛋白的多克隆抗体,该多克隆抗体检测到了酵母表达的寨卡病毒E蛋白.结论:ZIKV-E200蛋白的多克隆抗体可用于酵母表达的寨卡病毒E蛋白的检测等研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	军事医学研究院生物工程研究所	32	100	6.0	9.0
2	刘党生	沈阳药科大学生命科学与生物制药学院	25	244	8.0	15.0
3	吴军	军事医学研究院生物工程研究所	55	227	8.0	13.0
4	巩新	军事医学研究院生物工程研究所	33	121	6.0	10.0
5	王佳美	沈阳药科大学生命科学与生物制药学院	1	0	0.0	0.0