应用CRISPR/Cas9技术构建YOD1基因敲除小鼠

• 作者: 付业胜 张令强 戴红苗
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 YOD1 基因敲除小鼠
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 52-57
• 页数: 6页
• 分类号: Q343
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180607

摘要

目的:应用CRISPR/Cas9技术构建去泛素化酶YOD1基因敲除小鼠.方法:针对YOD1基因设计单链向导RNA(sgRNA)识别序列,构建sgRNA质粒,与Cas9质粒体外转录、纯化后注射入受精卵,通过PCR和测序验证得到FO代阳性小鼠.配繁两代后,取同窝对照的野生型(WT)和敲除(KO)小鼠的主要组织器官研磨,使用免疫印迹(WB)技术检测各组织YOD1蛋白的表达,确证YOD1敲除小鼠模型是否成功建立.统计YOD1杂合子(HET)自交存活后代各基因型比例,分析是否有胚胎致死表型.解剖小鼠分析主要组织器官的表型,进一步利用H.E.染色分析KO小鼠是否存在自发的病理改变.通过血糖耐受实验(GTT)分析KO小鼠的血糖调控能力.结果:基因组测序和WB检测结果显示KO小鼠中YOD1被明显敲除,YOD1敲除小鼠模型成功建立.YOD1杂合子自交后代各基因型比例符合孟德尔定律,提示KO小鼠非胚胎致死.YOD1敲除小鼠肝脏显著小于WT小鼠.GTT结果表明敲除YOD1不影响小鼠的血糖稳态.结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建YOD1基因敲除小鼠.KO小鼠正常出生,无任何胚胎发育缺陷.与WT小鼠相比,KO小鼠肝脏显著减小,但无显著的自发病理变化,KO小鼠血糖控制亦无显著差异.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张令强	军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室	6	0	0.0	0.0
2	戴红苗	军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
3	付业胜	军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0