麻鸭HSP90α基因的原核表达、纯化及磷脂结合活性的鉴定

• 作者: 张牧焓 张玉梅 徐为民 李鹏鹏 王晶晶 王道营
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 麻鸭 HSP90α 原核表达 纯化 磷脂结合
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 99-104
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 5565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201802016

摘要

为研究麻鸭(Anas platyrhynchas)热休克蛋白HSP90α结合肌内磷脂及抑制磷脂水解的作用机制,采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,以麻鸭骨骼肌细胞cDNA为模板扩增HSP90α基因,构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达,镍柱亲和层析和凝胶层析纯化可溶性重组蛋白.结果表明,获得的HSP90α开放阅读框全长为2 187 bp,编码728个氨基酸,预测的理论等电点约为5.构建的原核表达载体pCold1-HSP90α在大肠杆菌中成功可溶性表达了麻鸭HSP90α,并获得了高纯度的重组HSP90α蛋白.运用薄层层析证明该重组蛋白具有稳定结合磷脂酰胆碱的活性,并且该蛋白能显著削弱磷脂酶A2对磷脂的水解作用.该研究成功克隆并建立了麻鸭HSP90α基因的原核表达体系,制备了具有磷脂结合活性的重组蛋白,为进一步研究HSP90α与磷脂的相互作用及对肉品加工中磷脂的保护效应提供了理论支持.