PRIM1干扰慢病毒载体构建

• 作者: 卢海 孟镔 江金群
• 来源期刊: 局解手术学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 载体 慢病毒 干扰 PRIM1基因 肿瘤
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 775-777
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 2331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11659/jjssx.04E018161

摘要

目的 构建PRIM1基因的干扰慢病毒载体,供后续深入研究PRIM1基因在肿瘤形成中的机制.方法 以PRIM1基因为模板,按照RNA序列设计原则,完成RNA干扰靶点设计后,构建RPIM1基因RNA干扰慢病毒成含干扰序列的单链DNA oli-go,退火配对产生双链DNA;随后通过其两端酶切位点直接连入酶切后的慢病毒载体;将连接产物转入制备好的大肠杆菌感受态细胞,PCR鉴定阳性重组子,送测序验证,对测序结果比对正确的克隆进行质粒抽提.结果 对RNA序列设计软件评估后选取的干扰靶点序列,经过退火配对得到具有带黏性末端的双链的DNA;AgeI和EcoRI双酶切使GV115载体线性化;双链DNA oligo与线性化的载体连接的产物经PCR扩增后的序列与目标序列完全一致,获得测序结果正确的阳性克隆质粒.结论 以PRIM1基因为模板,按照载体设计构建常规方法成功构建PRIM1干扰慢病毒载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟镔	安徽理工大学医学院临床应用解剖教研室	89	421	9.0	14.0
2	卢海	粤北人民医院普通外科	3	2	1.0	1.0
3	江金群	粤北人民医院检验科	4	3	1.0	1.0