沙眼衣原体Lp xA蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 余锦强 刘珍凯 周贵春 李德坤 汪艳 穆迎涛 邵杰
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: 沙眼衣原体 LpxA蛋白 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 1436-1439
• 页数: 4页
• 分类号: R772
• 字数: 2766字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2018.08.054

摘要

目的 纯化沙眼衣原体LpxA蛋白并制备抗LpxA蛋白的多克隆抗体,为研究LpxA蛋白的功能奠定基础.方法 PCR扩增LpxA基因,以pET28a质粒为载体,构建表达质粒pET28a-LpxA,转化大肠埃希菌BL21,利用IPTG诱导含有6*His的融合蛋白表达,并使用Ni2+亲和层析柱进行纯化.以纯化的His-LpxA蛋白作为免疫原,经背部皮下免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并使用免疫印迹法检测抗体与His-LpxA蛋白的反应以及使用ELISA法测定多克隆抗体的滴度.结果 重组表达质粒pET28a-LpxA构建成功,融合His-LpxA蛋白的相对分子质量为32.8 kDa,能够在大肠杆菌中高效表达,纯化后目的蛋白纯度约为95％,免疫新西兰兔后,抗血清能够识别重组的His-LpxA蛋白,其滴度大于1:10240.结论 成功纯化了LpxA蛋白和制备了抗血清,为研究LpxA蛋白的功能提供实验基础.