TREM2基因过表达慢病毒载体的构建及其表达的研究

• 作者: 冉江霞 王成志 石胜良
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: TREM2 慢病毒 载体构建 过表达 293T细胞
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 436-440
• 页数: 5页
• 分类号: R373
• 字数: 3856字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2018.04.004

摘要

目的:构建小鼠编码2型髓样细胞触发受体(TREM2)基因过表达慢病毒载体,并且对其体外表达目的基因的水平进行检测.方法:采用PCR扩增TREM2基因片段,将扩增产物连接至经AgeI酶切后的线性化GV358载体;经PCR方法鉴定及DNA测序比对分析后,将其和包装质粒共转染至293T细胞并用药筛法行滴度测定.然后用重组慢病毒感染293T细胞,观察GFP表达并用实时定量PCR检测TREM2的表达水平.结果:通过PCR成功获得TREM2基因片段并连接到GV358病毒载体上,通过PCR及DNA测序鉴定均证实TREM2-GV358携带有正确的TREM2基因;在293T细胞中包装获得病毒并用药筛法测定病毒滴度为2.0×108 TU/mL.感染293T细胞后可观察到大量明显的荧光细胞;实时定量PCR检测结果显示,TREM2过表达慢病毒感染293T细胞后TREM2的表达水平明显增加(P＜0.05).结论:成功构建TREM2-GV358慢病毒载体,为TREM2基因的后期研究提供了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石胜良		68	325	9.0	14.0
2	王成志		10	8	2.0	2.0
3	冉江霞		2	0	0.0	0.0