胶原/硫酸软骨素/成纤维生长因子复合人工眼角膜的制备

• 作者: 单恒悦 张凤超 李响 毛宝亮 王颖 胡斌 袁琬娟 贾磊 陈敬华
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 胶原蛋白 硫酸软骨素 EDC-NHS交联剂 角膜支架 仿生 成纤维生长因子10 角膜上皮细胞 缓释 强度 生物材料
• 年，卷（期）: 2018,（14）
• 所属期刊栏目: 材料生物相容性
• 页码范围: 2203-2208
• 页数: 6页
• 分类号: R318
• 字数: 7822字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0767

摘要

背景:传统角膜支架材料的强度和生物相容相差,采用天然角膜组织成分的胶原和硫酸软骨素制备人工角膜尚未见报道.目的:制备具有缓释生长因子、高强度和透光性、良好生物相容性的胶原/硫酸软骨素/成纤维生长因子复合人工眼角膜.方法:将不同浓度(1％、5％、10％)的胶原溶液采用流延法制备为再生胶原膜,通过生物力学测试筛选出5％胶原溶液制备的再生胶原膜生物力学性能最优,用于制备复合膜.通过EDC-NHS交联法将不同质量浓度(2,20,80 g/L)的硫酸软骨素固定于再生胶原膜上,得到胶原/硫酸软骨素复合膜,通过透光率筛选出20 g/L硫酸软骨素制备的胶原/硫酸软骨素复合膜透光性最好,用于制备载生长因子复合膜.将胶原/硫酸软骨素复合膜与不同质量浓度(5,25,50 mg/L)的成纤维细胞因子10溶液共混于PBS中24 h,制备载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜,将其浸泡于PBS中,ELISA法检测上清液中生长因子水平.将再生胶原膜、胶原/硫酸软骨素复合膜及载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜分别与角膜上皮细胞共培养48 h,MTT法检测细胞增殖,筛选最佳载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜.将载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜与角膜上皮细胞共培养,48 h后,采用共聚焦显微镜观察细胞形态;72 h后,采用扫描电镜观察细胞形态.结果与结论:①成纤维生长因子10的释放量随复合膜中初始装载生长因子水平的增加而增加.同时,3种复合膜上的生长因子释放缓慢,并在72 h时分别达到11％、23％和30％,释放行为符合药代动力学过程;②通过MTT实验确定复合膜最佳生长因子负载质量浓度为25 mg/L;③共聚焦显微镜及扫描电镜显示,载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜可促进角膜上皮细胞的黏附、生长及增殖;④结果表明,载生长因子胶原/硫酸软骨素复合膜有望成为一种优良的人工角膜支架材料.