稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞单克隆株的建立

• 作者: 汪琳 章金刚 袁典 贾俊婷 马玉媛
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F 慢病毒载体 猪内源性反转录病毒
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 31-35,72
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3975字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.01.006

摘要

目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系.方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLen?ti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中的表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F的细胞单克隆株,最终West?ern印迹检测细胞单克隆株中pA3F的表达.结果:菌落PCR和序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×108 TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白的表达;经Western印迹鉴定,筛选得到的单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白.结论:建立了稳定表达pA3F的PK15细胞单克隆株,为进一步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用下的免疫逃逸机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾俊婷	军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所	2	0	0.0	0.0
2	袁典	军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所	1	0	0.0	0.0
3	汪琳	军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所	1	0	0.0	0.0
4	马玉媛	军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所	2	0	0.0	0.0
5	章金刚	军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所	2	0	0.0	0.0