罗氏沼虾几丁质酶3B基因的克隆及其在蜕皮周期中的表达

• 作者: Sarath Babu V 刘晓丹 卢志杰 叶成凯 张晓君 林蠡 潘淦 赵丽娟
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 罗氏沼虾 几丁质酶 基因克隆 蜕皮周期 表达
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 页码范围: 751-762
• 页数: 12页
• 分类号: Q786|S917.4
• 字数: 7812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20180511272

摘要

罗氏沼虾的生长发育及繁殖都与蜕皮紧密相关.几丁质酶是甲壳动物在蜕皮过程中最重要的酶之一.本研究对罗氏沼虾蜕皮周期外观特征和腹肢刚毛进行了观察描述,克隆并分析了罗氏沼虾的几丁质酶Ⅲ基因(MrCh i3B),制备了几丁质酶Ⅲ蛋白的多克隆抗体,研究了其在蜕皮周期中的表达.罗氏沼虾几丁质酶基因cDNA的开放阅读框为1 143 bp,编码380个氨基酸,大小为41.91 ku.通过氨基酸序列比对发现,MrChi3B与日本沼虾几丁质酶基因(Chi3B)的同源性最高,为94％.MrChi3B含有一个糖苷键水解酶家族18的催化域.实时定量PCR (qRT-PCR)和蛋白印迹法(WB)检测结果显示,MrChi3B在罗氏沼虾多个组织中均有表达,但是不同组织中的表达有差异.在蜕皮期之后,其在胃、表皮和肌肉中的表达量显著上升.在胃中其表达量在蜕皮间期达到最高;在表皮和肌肉中其表达量在蜕皮后期达到最高;肠中的表达量在蜕皮前期和蜕皮期有所上升;眼柄期的表达量在所有蜕皮期都偏低.本研究结果为进一步研究几丁质酶的功能提供参考依据.