探讨锚定多重PCR联合二代测序法用于产前诊断β-地中海贫血中的可行性研究

• 作者: 凌奕 叶彩霞 李崎 杨林 王红谦 石雅莉 马燕琳
• 来源期刊: 中国优生与遗传杂志
• 学科: 医学
• 关键词: β-地中海贫血 二代测序法 无创产前检测 产前诊断
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 分子遗传学与生化遗传学
• 页码范围: 11-14,18
• 页数: 5页
• 分类号: R556.71
• 语种: 中文

摘要

目的 探索与完善β-地中海贫血的无创产前检测技术,进一步探讨孕妇外周血浆游离胎儿DNA对胎儿β-地中海贫血无创性产前诊断的临床应用价值.方法 从2015年1月至2017年3月在海南医学院第一附属医院产前诊断中心就诊的孕妇中,选取5例夫妇为不同的β-地中海贫血基因型的家系,经孕妇及其丈夫知情同意后签署知情同意书.在妊娠16w至22w时行羊膜腔穿刺术抽取羊水这一传统的有创产前诊断方法,运用PCR联合RBD技术检测出胎儿β-地贫基因型,将此项检测结果作为产前诊断β-地贫的金标准;采用EDTA K2抗凝采血管分别抽取夫妇双方的前臂外周血,运用锚定多重PCR联合二代测序等一系列技术操作,通过检测孕妇外周血血浆中游离胎儿DNA (circulation free fetal DNA,cff DNA)获得胎儿地贫基因型,将其与金标准作比对,比较二者的一致性,从而推论孕妇外周血血浆cff-DNA对诊断胎儿β地中海贫血的准确性和稳定性.运用锚定多重PCR (AMP)联合二代测序法这一无创性产前检测方法,经过对比计算得出胎儿是否存在与其父亲一致的β地中海贫血基因突变型,将其与金标准对比.结果 1.运用锚定多重PCR (AMP)联合二代测序法经对比计算得出5个家系中,有2个家系的胎儿存在与其父亲一致的β地中海贫血突变型,其余3个家系的胎儿不存在与父亲一致的β地中海贫血突变型.2.存在与其父亲一致的β地中海贫血突变型的2个胎儿,其羊水地贫基因型均遗传了来自其父亲的β地中海贫血基因突变型;而其余3个不存在与其父亲一致的β地中海贫血基因突变型的胎儿,其羊水地贫基因型均没有遗传来自其父亲的β地中海贫血基因突变型.结论 目前胎儿地贫基因检测基于有创性手术获得胎儿DNA进行基因诊断,有一定的流产和宫内感染的风险.我们迫切需要找到安全、无创、准确、简便、早期诊断的方法,cff-DNA的发现开启了无创产前诊断的新篇章,且基于二代测序平台的NIPT技术无创产前诊断胎儿唐氏综合征已广泛应用于临床,其准确性可达99％,这为地贫无创产前诊断研究提供了新的思路.