大肠杆菌整合宿主因子的表达与纯化

• 作者: 余艳红 梁小珍
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 整合宿主因子 himA hip 共表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 220-223,239
• 页数: 5页
• 分类号: Q814.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.03.0039

摘要

[目的]构建大肠杆菌整合宿主因子两亚基的共表达载体并对其表达纯化条件进行探索.[方法]PCR扩增himA和hip基因,重叠PCR连接起来后利用重组酶连接到表达载体pET-duet1中,筛选阳性重组子,转化Rosetta(DE3)表达菌,调整诱导时IPTG的浓度及诱导时间,确定最佳诱导条件,最后通过himA基因C端的6×His标签与镍的结合,进行蛋白纯化.[结果]成功扩增himA和hip基因;重组表达载体pET-duet-himAhip经PCR和DNA测序鉴定构建成功;SDS-PAGE检测到大小约为11.1 kDa和10.7 kDa的目的蛋白,IHF的表达成功;37℃,A600=0.6 ～0.8时,在IPTG终浓度分别为0.2 mmol/L、0.5mmol/L条件下诱导2h、4h,目的蛋白的表达量没有明显区别.[结论]成功构建IHF两个亚基的共表达载体,在37℃诱导条件下简单快速得到等比例的可溶性IHF-α和IHF-β,为后续研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	余艳红		203	1976	21.0	35.0
2	梁小珍		2	0	0.0	0.0