桑树几丁质酶基因Machi1的克隆及原核表达

• 作者: 冉瑞法 唐芬芬 张永红 朱峰 李镇刚 白兴荣 肖圣燕 邵榆岚
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桑树 几丁质酶 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 634-642
• 页数: 9页
• 分类号: S888.2|Q943.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13441/j.cnki.cykx.2019.05.002

摘要

以桑品种云桑2号的健康叶片为材料,通过反转录PCR结合RACE方法克隆到桑树几丁质酶基因Machi1(GenBank 登录号:MK783295).Machi1基因的完整ORF序列长度为972 bp,编码323个氨基酸残基,预测Machi1蛋白分子质量为34.9kD,理论等电点(pU为6.84.结构分析显示Machi1蛋白含有一个信号肽,无跨膜结构域.Machi1蛋白属于糖苷水解酶19家族,含有保守的ChtBD1结构域,预测具有几丁质酶活性.多序列比对结果表明,Machi1蛋白与川桑几丁质酶Mnchi19一致性最高为93.5％,系统进化树结果与之相一致.组织表达模式分析结果表明,Machi1基因在桑树叶片中的表达量最高.随后通过原核表达系统获得了重组目的蛋白并进行了纯化,用纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔制备Anti-Machi1多克隆抗体.利用间接ELISA法测定其效价在1∶80 000以上,并经Western blotting验证了该多克隆抗体的特异性,为后续研究Machi1的抗病机制及生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冉瑞法		14	2	1.0	1.0
2	唐芬芬		11	0	0.0	0.0
3	邵榆岚		9	0	0.0	0.0
4	张永红		10	0	0.0	0.0
5	朱峰		8	0	0.0	0.0
6	白兴荣		17	0	0.0	0.0
7	肖圣燕		2	0	0.0	0.0
8	李镇刚		5	0	0.0	0.0