草莓ARF4基因启动子的克隆及转录活性分析

• 作者: 关宇涵 张志宏 李贺 王矢乔 董向向
• 来源期刊: 沈阳农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草莓 ARF4 启动子 转录活性分析
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 513-521
• 页数: 9页
• 分类号: S668.4
• 字数: 6178字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1700.2019.05.001

摘要

草莓果实成熟的早晚,直接影响果农的收益.课题组前期研究发现,草莓A R F4基因能够调控草莓开花时间.启动子是基因转录的开关,其转录活性影响着基因表达的强弱.克隆ARF4基因启动子并分析其转录活性,对进一步明确ARF4基因的功能具有重要意义.根据草莓基因组信息设计特异引物,克隆草莓A RF4基因启动子.使用Plant CARE在线软件,预测其序列上的顺式作用元件.将ARF4启动子进行分段缺失克隆,利用农杆菌介导的果实注射法及GUS组织染色,确定GUS基因表达的强弱.通过农杆菌介导的叶盘转化法,获得转proARF4::GUS基因草莓植株,利用GUS组织染色法分析启动子的组织表达特异性.对转基因草莓植株进行非生物胁迫处理,通过qRT-PCR方法确定影响ARF4基因启动子转录活性的因素.结果表明:在ARF4基因启动子序列上,除了存在基本的核心元件外,还包含一些光响应、胁迫响应、厌氧诱导及激素响应等作用元件.GUS组织染色结果显示,随着启动子序列长度逐渐变短,GUS基因表达变弱.在转proARF4::GUS基因草莓植株叶柄、嫩叶及新茎中GUS表达水平较高,且在嫩叶中表达量最高.在非生物胁迫处理下,IAA和GA可使GUS基因表达显著提高.这些结果提供了影响ARF4基因表达的相关因素,为调控草莓开花时间奠定了基础.