鼠CCL5蛋白的原核表达与纯化

• 作者: Seitkamal N.Kuanysh 夏雪山 宋玉竹 张金阳 胡腾 韩芹芹
• 来源期刊: 昆明理工大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 趋化因子CCL5 原核表达 Transwell试验 活性测定
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 生命科学与医学
• 页码范围: 97-104
• 页数: 8页
• 分类号: Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.16112/j.cnki.53-1223/n.2019.04.014

摘要

趋化因子(CCL5)是由正常T细胞分泌的典型的具有趋化活性的细胞因子,分子量8kD,属于CC型趋化因子的β家族成员之一,并调控T淋巴细胞的活性和分泌能力.本研究旨在克隆小鼠趋化因子CCL5基因并在原核表达系统中实现表达,获得与His标签融合的重组趋化因子mCCL5蛋白,并测定其在体外的趋化活性.将趋化因子CCL5基因扩增并插入pET-28a原核表达载体,转化至Rosetta感受态细胞中.重组mCCL5蛋白以IPTG诱导表达,再以Ni-NTA纯化系统进行纯化.Transwell实验检测重组CCL5蛋白的趋化活性.结果显示pET-28a-mCCL5原核表达载体成功构建,mCCL5蛋白在细菌中大量表达并主要以包涵体的形式存在.表达产物以SDS-PAGE和免疫印迹鉴定,Transwell实验证实趋化因子能够显著促进巨噬细胞RAW264.7细胞的迁移.带有His标签重组鼠趋化因子CCL5的成功表达,为下一步CCL5抑制剂的筛选奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏雪山		79	338	10.0	14.0
2	张金阳		19	19	3.0	4.0
3	宋玉竹		28	48	4.0	6.0
4	韩芹芹		15	10	2.0	3.0
5	Seitkamal N.Kuanysh		2	0	0.0	0.0
6	胡腾		2	0	0.0	0.0