hIAPP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化和鉴定

• 作者: 刘夫锋 尚金召 熊聿力 王雪芹 路福平
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人胰岛淀粉样多肽 麦芽糖结合蛋白 融合表达 纯化 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 25-30,41
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 字数: 4161字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20180200

摘要

基于人胰岛淀粉样多肽(hIAPP)的氨基酸序列,按照大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性合成基因,并克隆到pMAL-c2x载体中,与MBP蛋白malE基因融合表达,获得重组表达质粒pMAL-hIAPP.将质粒pMAL-hIAPP转化到表达宿主E.coli BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白MBP-hIAPP表达.SDS-PAGE电泳显示融合蛋白MBP-hIAPP的相对分子质量约为4.9×104.利用重组型烟草蚀纹病毒的半胱氨酸蛋白酶(rTEV)酶切MBP-hIAPP,并采用凝胶过滤层析的方法分离出高纯度的hIAPP,利用MALDI-TOF质谱进行了验证.