携带NMU2R shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其评价

• 作者: 殷钟意 郑旭煦 郭莉霞
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: neuromedinU2受体 RNA干扰 重组腺相关病毒
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 14-17
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9|Q78
• 字数: 3296字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2019.03.014

摘要

构建稳定表达NMU2R shRNA的重组腺相关病毒载体,制备并纯化靶向性沉默NMU2R表达的高滴度重组腺相关病毒.首先设计合成NMU2R shRNA,退火形成双链与pAAV-ZsGreen-shRNA质粒BamH I和Hind III双酶切产物相连接构建形成质粒pAAV-ZsGreen-rNMU2R shRNA,经双酶切和测序鉴定证实,重组质粒克隆正确,将重组质粒转染到AAV-293包装细胞中包装成腺相关病毒载体,成功制备重组腺相关病毒rAAV5-ZsGreen-rNMU2R shR-NA,经测定纯化所得rAAV5病毒滴度为1×1012 vg/mL.最后将rAAV5-ZsGreen-rNMU2R shRNA感染大鼠嗜铬细胞瘤细胞PC12,检测NMU2R shRNA基因沉默效果,利用空病毒载体pAAV-ZsGreen-shRNA作对照,Real-time PCR及Western Blot方法测得NMU2R mRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著下降.综上,成功构建了高滴度携带NMU2R shRNA重组腺相关病毒载体rAAV5-ZsGreen-rNMU2R shRNA.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑旭煦	重庆工商大学环境与资源学院	121	1005	18.0	23.0
3	殷钟意	重庆工商大学环境与资源学院	79	645	15.0	21.0
5	郭莉霞	重庆工商大学环境与资源学院	22	95	6.0	9.0