BPV1贵州株L1基因序列分析及原核表达

• 作者: 丁尊俄 刘丽娟 周碧君 张旭 张海 文明 王开功 程振涛 罗引幸 赵大杰
• 来源期刊: 中国兽药杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 贵州株 L1基因 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 微生物与免疫
• 页码范围: 1-10
• 页数: 10页
• 分类号: S852.65
• 字数: 5259字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11751/ISSN.1002-1280.2019.02.01

摘要

为表达牛乳头瘤病毒1型贵州株(BPV1-GZLZ株)衣壳蛋白L1基因,采用PCR方法从贵州省六枝特区某规模化养牛场疑似病牛的皮肤肿瘤病料样品中扩增BPV1 L1基因,克隆至pMD19-T载体,测序后进行生物信息学分析;同时将BPV1-GZLZ株L1基因克隆于原核表达质粒pColdⅠ中,经IPTG诱导L1蛋白表达,并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting分析.生物信息学分析显示,BPV1-GZLZ株L1基因核苷酸序列长为1488 bp,编码495个氨基酸,分子结构式为C2484H3884N678O737S16,理论等电点(PI)为8.68,二级结构主要包括α-螺旋、无规则卷曲和β-折叠为主,无跨膜结构域和信号肽;BPV1-GZLZ L1基因序列与BPV1参考株的核苷酸和氨基酸同源性均为99.8％,处在同一遗传进化分支,且与BPV13和BPV2、BPV2-GZ01的亲缘关系较近;Western blotting结果显示,经IPTG诱导的重组表达蛋白能与His单抗产生特异性反应,条带为55.6 kD左右与SDS-PAGE结果一致.研究表明,试验构建了BPV1-GZLZ株L1基因原核表达载体并成功表达.