广藿香PTS基因的克隆及CPEC法构建其过表达载体pRI101-PTS

• 作者: 严寒静 何梦玲 卢昌华 张宏意 胡贞贞 黄伟展
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 广藿香 广藿香醇合酶 倍半萜合酶 环形聚合酶延伸克隆 生物信息学
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 天然药物化学
• 页码范围: 186-192
• 页数: 7页
• 分类号: R284.1
• 字数: 5723字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019012102

摘要

目的 克隆广藿香中广藿香醇合酶(PTS)基因的cDNA序列,并构建其pRI101-PTS植物表达载体.方法 利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得PTS基因的cDNA序列,利用生物信息学软件对T-A克隆后的序列进行分析,预测其编码蛋白的理化性质、结构和功能.以环形聚合酶延伸克隆(CPEC)构建pRI101-PTS过表达载体.结果 PTS基因的开放阅读框全长1 659 bp,编码552个氨基酸.该蛋白分子量为64.1 ku,等电点为5.39,含有DDxxD保守序列,具有2个倍半萜合酶结构域,C末端结构域268个氨基酸残基可能涉及线性萜烯的环化,成功构建了pRI101-PTS过表达载体.结论 PTS的克隆、植物过表达载体的构建及生物信息学分析为其他倍半萜类合成酶基因的发现和研究提供了参考,也为进一步研究其生物合成调控机制甚至代谢工程奠定基础.