A型塞内卡病毒衣壳蛋白的原核表达及其五聚体的组装

• 作者: 姚学萍 孙世琪 宋品 曹随忠 穆素雨 莫亚霞 董虎 郭慧琛
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: A型塞内卡病毒 重组质粒 原核表达 五聚体
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 969-976
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0098

摘要

为实现A型塞内卡病毒(SVA)衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并组装为五聚体,本试验以带His标签和SUMO(小泛素样修饰系统)标签的pSMK及pSMA为载体,将塞内卡病毒衣壳蛋白基因VP0、VP1和VP3构建为重组质粒pSMA-VP0、pSMK-VP1、pSMK-VP3,在大肠杆菌原核表达系统中对其进行共表达并优化诱导表达条件,包括诱导温度、诱导剂IPTG浓度、诱导前细菌D600值以及诱导时间,纯化后获得SVA衣壳蛋白后进行免疫印迹分析,之后利用His-SUMO蛋白酶切除标签蛋白,在体外进行组装和鉴定.结果,A型塞内卡病毒衣壳蛋白VP0、VP1、VP3在20℃下、D600值为1.1、IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导12h后蛋白表达效果最好.经超声破碎、镍柱纯化后获得VP0、VP1、VP3蛋白,免疫印迹结果表明,目的蛋白能与SVA阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性.动态光散射和扫描电镜检测结果显示,去除His-MUMO后还原天然构象的目的蛋白可组装成五聚体.上述研究结果为制备SVA病毒样颗粒奠定了物质基础.