蛋清源抗氧化肽对HEK293细胞氧化应激损伤的抑制作用及机制

• 作者: 刘静波 张婷 张燕 赵颂宁 陈志飞
• 来源期刊: 中国食品学报
• 关键词: 蛋清源活性肽 HEK293细胞 抑制氧化应激 抗氧化酶活性 蛋白质免疫印迹技术
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 营养与功能
• 页码范围: 11-22
• 页数: 12页
• 语种: 中文
• DOI: 10.16429/j.1009-7848.2019.10.002

摘要

食源性抗氧化肽以其安全性高,抗氧化能力好,逐渐成为多肽研究领域的热点.本文以蛋清卵黏蛋白胃蛋白酶水解产物为原料,以蛋清源五肽作为研究对象,首先,采用基于不同机理的体外抗氧化活性化学测定方法,对8条蛋清源五肽的抗氧化活性进行评价.DPPH自由基清除活性最强的为五肽CFDVF,浓度为1.0 mmol/L时,其自由基清除率为50.14％ ±2.1％;ABTS+·自由基清除能力最强的为五肽VYQFL,浓度为100μmol/L时,TEAC值为(94.66±0.37)μmol/L TE/100μmol/L;ORAC活性最强的为五肽WNWAD,TEAC值为(2.53±0.18)μmol/L TE/μmol/L.接着,利用HEK293细胞氧化损伤模型评价8条五肽的抗氧化活性,其中五肽WNWAD(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp)的氧化应激抑制活性最强.同时,细胞毒性试验证明,五肽本身对细胞无毒副作用,也无促进增殖作用.最后,综合体外化学和细胞试验结果,筛选出WNWAD进行蛋清肽氧化应激抑制机制研究.首先采用试剂盒方法检测细胞内LDH活性和MDA含量,以及抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,结果表明H2O2可导致细胞LDH释放率上升,MDA含量增高,而WNWAD可以抑制脂质过氧化进程,维持细胞膜完整性,提高细胞内LDH活性,降低MDA含量;H2O2可以抑制细胞内抗氧化酶CAT、T-SOD和GSH-PX的活性,而经过WNWAD预处理,可以显著增强其活性;随着肽浓度的升高,3种酶的活性均有所提高,呈浓度依赖型关系,尤其在肽的浓度为1.0μmol/L时,过氧化氢酶(CAT)活力为(20.63±0.51)U/mg蛋白、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力为(179.39±5.73)U/mg蛋白,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)为(33.97±5.02)个活力单位,较对应损伤组的酶活性均有显著性提高(P<0.01);最后,利用蛋白质免疫印迹技术检测细胞内抗氧化酶相关蛋白表达水平,结果表明:WNWAD预处理可在一定程度上恢复H2O2诱导损伤的HEK293细胞中抗氧化酶CAT、SOD和GSH-PX的蛋白表达水平.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘静波	吉林大学食品科学与工程学院	228	1723	20.0	29.0
2	张婷	吉林大学食品科学与工程学院	123	290	9.0	12.0
3	张燕	吉林大学食品科学与工程学院	46	211	7.0	13.0
4	赵颂宁	吉林大学食品科学与工程学院	14	59	5.0	7.0
5	陈志飞	吉林大学食品科学与工程学院	1	0	0.0	0.0