猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

• 作者: 刘玉伟 吴晓燕 孙盼盼 彭喆 时建立 李俊 王永明 王硕 辛长勋 高梅
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（下半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 Cap蛋白 ORF2 原按表达 优化条件 纯化
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 兽医科学
• 页码范围: 68-71
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.01.0337

摘要

为了表达并纯化猪圆环病毒 2型(Porcine circovirus 2,PCV-2)Cap蛋白,试验将 ORF2基因的密码子改造为大肠杆菌嗜好的密码子,但编码的氨基酸序列不变.合成优化后将 ORF2基因全部基因序列,克隆于 pET-30a原核表达载体并转化至大肠杆菌 BL21 中,经 PCR和测序鉴定阳性克隆后,采用 IPTG诱导表达目的蛋白.优化蛋白表达条件,采用 Ni-NTA亲和层析肢纯化目的蛋白.结果表明:基因序列合成正确,无点突变.重组质粒成功转化入大肠杆菌 BL21 中,经诱导表达出现约37 ku的蛋白条带,与预期分子量大小一致.优化表达条件后,加入终浓度为 1.2 mmoVL IPTG诱导6 h,表达产物含量最高.经 Western-blot检测,能被 PCV-2抗体阳性血清结合.说明成功构建了PCV-2 Cap蛋白的原核表达质粒 pET-30a-ORF2,优化了表达条件并纯化出目的蛋白.