牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘云霞 孙文超 尹逊哲 张必凯 张萍 肖朋朋 解长占 金宁一 靖杰 韩继成 马海彬 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛支原体 P48蛋白 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 678-682,694
• 页数: 6页
• 分类号: S852.62
• 字数: 3862字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.04.13

摘要

为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点.利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达.采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析.结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好.采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法.该方法组内及组间变异系数均小于7％,重复性较好.临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高.