酿酒酵母胱硫醚β-裂解酶的异源表达及催化生成糠硫醇

• 作者: 卢松 孙宝国 扎木苏 杨华青 王成涛 王鑫
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 酿酒酵母 胱硫醚β-裂解酶 异源表达 体外催化 糠硫醇
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 55-61
• 页数: 7页
• 分类号: TS201.3
• 字数: 5442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-20180131-430

摘要

为明晰糠硫醇生物转化机制,将来源于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)G20的胱硫醚β-裂解酶(cystathionine β-lyase,Str3p)在大肠杆菌(Escherichia coli)中实现异源表达,并验证其催化性质.正交设计试验优化大肠杆菌基因工程菌蛋白表达的诱导条件,其最适诱导表达条件为诱导温度20℃、异丙基硫代半乳糖苷浓度0.5 mmol/L、诱导时间13h.该条件下获得的菌体经超声破碎和镍柱亲和层析,纯化得到的可溶性Str3p分子质量约为52 kDa,其表达量达1.26 mg/mL,较优化前的表达量和酶活力分别提高41.7％和38.6％.实验发现Str3p能够催化裂解半胱氨酸-糠醛加合物生成糠硫醇,且催化过程受pH值影响较大,在pH 8.0时糠硫醇产量达到47 μmol/L.本研究确定Str3p在E.coli BL21中的异源表达及催化特性,为生物转化合成天然糠硫醇提供新的参考途径.