人黑素瘤相关抗原D4原核表达条件的优化

• 作者: 李霞琼 罗育 蔡丹昭 谢小薰 贺菽嘉 邓芸婷 顾永耀 高精洧 黄冠文
• 来源期刊: 广西医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 黑素瘤相关抗原D4 原核表达 优化
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1050-1055
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16190/j.cnki.45-1211/r.2019.07.003

摘要

目的:探索黑素瘤相关抗原D4 (MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量.方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5～3 h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1～0.9 mmol/L)和诱导时间(1～8 h)等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和Image J软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析.通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性.结果:将重组质粒转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9 mmol/L,37℃诱导培养7h,可有效提高目的蛋白的表达量.可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5％.肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57％(10/35),其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人(P＜0.05).结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白.