单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达

• 作者: 乔军 伍晔晖 孟庆玲 才学鹏 王登峰 王立霞 蔡扩军 郭晶
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 单核细胞增生李斯特菌 内化素Lmo0549 克隆 分子特征 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（18）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医与水产蚕桑
• 页码范围: 199-203
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 字数: 4609字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.18.043

摘要

应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序,并对其进行生物信息学分析;通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列,并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体,转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalactoside,简称IPTG)诱导表达,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性.序列分析结果表明,扩增得到的lmo0549基因全长为2034 bp,编码677个氨基酸,其信号肽序列是前23个氨基酸,在Lmo0549蛋白氨基酸序列中,从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LPR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域;同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个.同源性分析显示,LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e,(NC_003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04％,且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性.SDS-PAGE分析显示,表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量;蛋白质印迹法分析表明,重组蛋白Lmo0549与LM阳性血清可发生特异性免疫反应,为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	才学鹏	中国农业科学院兰州兽医研究所	141	790	15.0	21.0
2	王登峰	新疆畜牧科学院兽医研究所	29	182	7.0	12.0
3	乔军	石河子大学动物科技学院	103	346	8.0	14.0
4	蔡扩军		39	73	5.0	6.0
5	孟庆玲	石河子大学动物科技学院	77	254	7.0	13.0
6	伍晔晖	石河子大学动物科技学院	12	17	2.0	4.0
7	王立霞	石河子大学动物科技学院	7	4	1.0	2.0
8	郭晶	石河子大学动物科技学院	6	1	1.0	1.0