基于IRES转录效率不同构建绿色荧光蛋白差异表达载体

• 作者: 聂晶晶 胡继红 许成山 陶凤蓉 骈亚亚 高振祥
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 翻译起始 真核生物mRNA 核糖体内部进入位点 病毒
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 应用技术
• 页码范围: 459-464
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20200415-00199

摘要

目的 根据IRES末端序列的不同,构建4个GFP表达强度不同的逆转录病毒载体,为后续流式检测或成像提供基础.方法 利用脑心肌炎病毒IRES的转录效率依赖于其末端的基因序列,通过重叠PCR方法将IRES与EGFP融合成4个不同连接方式的片段,然后克隆至逆转录病毒载体pMSCV-NGFR中;PCR扩增NGFR片段,克隆至逆转录病毒载体pMSCV-IRES-EGFP前面;逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP转染293T细胞,分析EGFP的表达比例和平均荧光强度(MFI),同时分析NGFR的表达.结果 成功构建4个逆转录病毒载体pMSCV-NGFR-IRES-EGFP;在293T细胞转染4个逆转录病毒载体,24 h和48 h时EGFP的表达效率没有明显差异,但荧光强度却有明显不同,同时NGFR的表达没有明显不同,说明IRES与EGFP之间加入不同的核苷酸序列,会使EGFP的荧光强度呈现明显差异.结论 EGFP的表达强度受IRES与EGFP之间序列的影响,不同强度EGFP的逆转录病毒载体可以适用于不同的实验要求.