鳕鱼皮免疫活性肽的制备

• 作者: 周勰 陈楚央 唐云平 陈艳 杨最素
• 来源期刊: 浙江海洋大学学报（自然科学版）
• 关键词: 鳕鱼皮 MTT法 碱性蛋白酶 RAW264.7细胞 免疫活性肽
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 页码范围: 484-489
• 页数: 6页
• 分类号: TS254.9
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-830X.2020.06.002

摘要

本研究旨在探究鳕鱼皮免疫活性肽的最优制备条件以及对RAW 264.7巨噬细胞免疫功能的影响.实验以鳕鱼皮为原料,选用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶对其进行酶解,通过MTT法细胞增殖实验,以巨噬细胞RAW 264.7的相对增殖率为筛选指标,从4种实验酶种里选出最佳酶种;通过单因素和L9(34)正交试验在最佳酶种的基础上确定最佳酶解条件.将酶解液超滤分成4组分子段,检测不同分子段对RAW 264.7细胞的增殖率,并在倒置显微镜下观察细胞形态的变化.结果表明提取鳕鱼皮免疫活性肽的最优蛋白酶为碱性蛋白酶,其最优酶解条件:酶解时间7 h、加酶量2500 U·g-1、pH为8、酶解温度50℃,经超滤得到的<1 kD的肽段对RAW 264.7细胞有明显的促增殖作用.随着酶解液浓度的升高,细胞出现分化和伪足的数量也明显增多.因此碱性蛋白酶酶解所得的鳕鱼皮活性肽能够增强RAW 264.7细胞的免疫活性.