GLUT1启动子荧光素酶报告基因系统的构建及鉴定

• 作者: 任鑫鑫 刘坤 李玲 梁迎春 罗沙柳 罗菲 蔺静 马超
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄糖转运体1型 低氧诱导因子1α 启动子 荧光素酶报告基因 基因表达 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 510-514
• 页数: 5页
• 分类号: R737.9|Q786
• 字数: 3944字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2020.07.007

摘要

目的 克隆并构建葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)启动子的荧光素酶报告基因载体并检测其活性.方法 以ZR75-1细胞提取的基因组为模板进行PCR扩增,将获得的GLUT1启动子片段酶切后连接至荧光素酶报告载体pGL4-basic中,重组质粒pGL4-basic-GLUT1经测序正确后与空载体分别转染293T细胞,并检测启动子活性;再将pGL4-basic-GLUT1同myc-HIF1α或对照质粒pXJ-40-myc转染ZR75-1细胞,分别在高糖和低糖条件下培养,检测启动子活性,探讨低氧诱导因子1α(HIF1α)对GLUT1启动子活性的影响.结果 DNA测序显示,扩增片段与GLUT1启动子片段的序列一致.荧光素酶活性实验显示,转染pGL4-basic-GLUT1后,GLUT1启动子较对照组有较高活性(P<0.001);低糖条件下,pGL4-basic-GLUT1与myc-HIF1α共转染,GLUT1启动子活性更强(P=0.042).结论 成功构建了GLUT1启动子报告基因载体,明确了HIF1α在高糖和低糖条件下对GLUT1启动子活性的增强作用,为深入研究GLUT1在肿瘤细胞代谢中的作用奠定了基础.