巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析

• 作者: 叶伟 孔亚丽 朱牧孜 李赛妮 章卫民 钟国华
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 巴戟天 Cytospora rhizophorae proL基因 克隆 表达 生物信息学
• 年，卷（期）: 2020,（4）
• 页码范围: 82-89
• 页数: 8页
• 分类号: Q936
• 字数: 5675字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201912016

摘要

[目的]从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础.[方法]利用PCR技术从C.rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能.[结果]克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33754.22,原子数为4696,等电点为5.69,为酸性蛋白.ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9％ 的ProL蛋白.生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40％,其三维结构模型中包含8个 α?螺旋和8个 β?折叠,保守氨基酸序列为207～216位.[结论]ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用.