Taq DNA聚合酶及Flap核酸内切酶的玻璃化室温储存方法研究

• 作者: 邢思熙 阚俊虎 王润元 王启扉 盛楠 邹秉杰 宋沁馨 周国华
• 来源期刊: 药物生物技术
• 关键词: Taq DNA聚合酶 重组Flap核酸内切酶1 玻璃化 赋形剂 室温储存 稳定性考察
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 495-500
• 页数: 6页
• 分类号: Q55
• 语种: 中文
• DOI: 10.19526/j.cnki.1005-8915.20200601

摘要

研究对商品化的Taq DNA聚合酶及自表达的重组Flap核酸内切酶1(Flap endonuclease 1,FEN1)进行玻璃化的方法,实现室温(25℃)条件下储存的目的.对购置的商品化的Taq DNA聚合酶使用海藻糖作为赋形剂,对实验室自表达的FEN1使用海藻糖及普鲁兰糖作为赋形剂,采用快速降温以及真空冷冻干燥除水的方法进行玻璃化制备.产品外部放置干燥剂并密封于室温条件下存放,分别对两种玻璃化酶进行时间储存稳定性的考察,对Taq DNA聚合酶采用考察扩增效率与扩增灵敏度的方式表征酶活,对FEN1采用已建立的方法测定酶活性的绝对数值.采用玻璃化产品相对对照品随时间变化有无显著性差异来预计储存时间.时间稳定性考察说明玻璃化Taq DNA聚合酶在室温下可稳定储存至少6个月,其相对于按照说明书中-30℃存放的对照品酶的扩增灵敏度在0d至第6个月无显著性差异(P＞0.05),1年出现后延产生显著性差异(P＜ 0.01).玻璃化FEN1在室温下可稳定储存至少1个月,其相对于-30℃存放的对照品酶,活性比值在Od至30 d无显著性差异(P＞0.05),第2个月出现下降(P＜0.01).本文建立的方法成功制备了两种玻璃化酶,可用于室温下储存较长时间,便于运输和使用.