稳定表达小鼠CD40L的NIH3T3细胞系的建立及其在B细胞培养和激活中的应用

• 作者: 何琦琳 余琳 杨希 郎巧利 黄楠
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: 鼠CD40L 稳定转染 NIH3T3细胞 饲养细胞
• 年，卷（期）: 2020,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 118-124
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2020.01.0014

摘要

该研究构建小鼠CD40L真核表达重组质粒pcDNA3.1-mCD40L,通过电转法将重组质粒转至NIH3T3细胞中.利用G418对转染后细胞进行压力筛选,获得稳定转染细胞株.提取稳定转染细胞株RNA,通过RT-PCR法检测Neo基因的mRNA表达情况.分离稳定转染细胞上清,利用ELISA法检测小鼠CD40L蛋白水平的表达情况.RT-PCR结果显示,Neo基因能够在稳定转染细胞中表达,ELISA结果显示,获得的稳定转染细胞株NIH3T3-mCD40L细胞上清中CD40L的表达量高达1.286 ng/mL.进一步活性研究表明,该细胞系能够在体外与IL-2和IL-21共同作用培养B细胞至14天,并刺激B细胞产生特异性抗体.该细胞系的成功构建,为利用体外B细胞分离培养和活化法分离特异性单克隆抗体奠定了良好的基础.