山楂鲨烯合酶CpSQS1,CpSQS2的基因克隆及原核表达分析

• 作者: 于大庆 单婷玉 徐睿 查良平 袁媛 韩晓静
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 山楂 鲨烯合酶 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 分子生药学
• 页码范围: 1334-1341
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20200105.103

摘要

为认识山楂三萜成分生物合成途径中鲨烯合酶基因结构特征,克隆获得山楂鲨烯合酶基因并进行生物信息学分析和原核表达分析.通过RT-PCR方法从山楂果实中克隆获得2条鲨烯合酶CpSQS1,CpSQS2的基因,其ORF长度分别为1 239,1 233 bp,分别编码412,410 aa.使用在线工具预测CpSQS1,CpSQS2均为稳定的酸性蛋白,二级结构主要由α-螺旋结构组成,利用同源建模对三级结构进行预测;结构功能域分析表明,CpSQS1和CpSQS2的35～367 aa都具有反式异戊烯基焦磷酸合酶的保守结构域;跨膜结构域分析预测CpSQS1,CpSQS2均具有2个跨膜结构域;序列分析表明山楂、丹参、甘草SQS基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性;系统进化树分析显示CpSQS1,CpSQS2与蔷薇科的苹果MdSQS1,MdSQS2聚为一支,与系统进化规律一致;构建原核表达载体pGEX-4T-1-CpSQS1,pGEX-4T-1-CpSQS2转化至大肠杆菌Transetta (DE3)进行诱导表达,在65 kDa处均能成功表达出目的蛋白;基因表达分析结果显示,CpSQS2的基因表达水平在山楂的3个不同发育时期均明显高于CpSQS1.该研究首次克隆并分析了山楂SQS1,SQS2基因,为进一步研究山楂三萜生物合成途径奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	于大庆	安徽中医药大学药学院	3	3	1.0	1.0
2	韩晓静	安徽中医药大学药学院	3	3	1.0	1.0
3	单婷玉	安徽中医药大学药学院	1	0	0.0	0.0
4	徐睿	安徽中医药大学药学院	1	0	0.0	0.0