利用特异性抗体建立金黄色葡萄球菌肠毒素B快速检测方法

• 作者: 周刘忠 胡乃静 张丁木 王志宏 吴佳果 罗龙龙 石艳春
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌肠毒素B 检测抗体 双夹心酶联免疫吸附检测法 胶体金层析检测法
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 720-726
• 页数: 7页
• 分类号: R392.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2020.06.016

摘要

目的:利用特异性靶向金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的抗体建立2种体外快速检测SEB的方法.方法:通过间接ELISA法及生物膜干涉技术测定3株抗体(LXY8、LXY9和LXY10)与SEB的结合活性;通过竞争ELISA法鉴定3株抗体的表位交叉情况;利用配对抗体建立双夹心ELISA检测法和胶体金试纸条层析技术检测SEB.结果:3株抗体与SEB均具有较高的亲和力(LXY8:KD=5.25×10-10 mol/L;LXY9:KD=5.18×10-9 mol/L;LXY10:KD=8.93×10-10 mol/L);经间接ELISA法获得生物素标记的抗体与SEB结合的最低饱和浓度为0.25μg/mL,以该浓度作为抗原表位竞争的浓度,竞争ELISA结果表明3株抗体与SEB结合的表位不交叉;根据双夹心配伍实验的结果,获得LXY8与LXY10的最佳配对,SEB的最低检测限为240 pg/mL,而基于LXY8与LXY10配对的胶体金检测试纸条能够在5～10 min内完成样品的检测,且检测灵敏度约为2 ng/mL.结论:基于双夹心酶联免疫吸附技术建立了一种特异、灵敏的体外检测SEB的方法,利用胶体金层析技术开发了SEB快速检测的胶体金检测试纸条,能够实现SEB现场快速高效检测.