粪便标本中诺如病毒GⅡ拷贝数定量检测方法的建立和应用

• 作者: 孙强明 张兰胜 赵跃丽 饶清
• 来源期刊: 中国感染控制杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 诺如病毒GⅡ 病毒拷贝数 实时荧光定量PCR 标准曲线
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 864-870
• 页数: 7页
• 分类号: R373
• 语种: 中文
• DOI: 10.12138/j.issn.1671-9638.20205960

摘要

目的 构建诺如病毒GⅡ(Norovirus GenogroupⅡ,NoV GⅡ)拷贝数标准质粒及其检测体系.方法 将合成高度保守的NoV GⅡ基因序列片段克隆至pUC57载体上,构建NoV GⅡ标准质粒,采用聚合酶链反应(PCR)进行验证.通过实时荧光定量PCR扩增曲线结果绘制Ct值与病毒拷贝数的标准曲线,求得其相应的标准曲线方程.采用建立的标准质粒及其检测体系对2018年12月昆明市儿童医院4份临床粪便标本进行检测.结果 经PCR验证,NoV GⅡ拷贝数的标准质粒构建正确.采用实时荧光定量PCR的扩增曲线获得Ct值与病毒拷贝数相对应的标准曲线方程为Y=-3.972X+39.03,R2=0.991,4份粪便标本原液NoV GⅡ病毒拷贝数分别为30443.45、9468.40、53176.69、4493.12 copies/μL.结论 成功建立用于检测粪便标本中NoV GⅡ病毒拷贝数的标准质粒及其检测体系,可为疾病的预防控制和相关试验研究提供有效的定量检测方法.