EMA-qPCR检测活沙门菌方法研究

• 作者: 张茂俊 梁昊 段永翔 闻子钰 鞠长燕 顾一心 马艳萍
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 叠氮溴化乙锭(EMA) EMA最优使用浓度 荧光定量PCR(qPCR) Ct值 沙门菌
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 219-222
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2+2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2020.03.05

摘要

目的 为解决荧光定量PCR(qPCR)方法不能区分死菌和活菌的问题,探索一种快速定量检测“活的”沙门菌的技术路线.方法 将不同浓度叠氮溴化乙锭(EMA)作用于不同浓度的死/活沙门菌后,用qPCR检测沙门菌Ct值,确定EMA的最优使用浓度.在混合菌量为106、105、104、103 CFU/mL,活菌比例为0％、10％、30％、50％、70％、100％条件下,确定EMA处理过的活菌+死菌,未加EMA的活菌+死菌,未加EMA的活菌+生理盐水三组菌的Ct值,研究EMA-qPCR法对死/活沙门菌的区分能力.结果 EMA浓度低于50 μg/mL,EMA处理活菌组与EMA未处理活菌组的Ct值差异无统计学意义.综合考虑,EMA最优使用浓度为10μg/mL.采用10 μg/mL EMA进行预处理,混合菌量为106、105、104、103CFU/mL时得出的结果一致:活菌比例为0％,≤50％,＞50％时,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+死菌两组Ct值差异(ΔCt)分别为≥5,≥1,＜1.同时,除活菌比例0％外,其他活菌浓度下,EMA处理过的活菌+死菌与未加EMA的活菌+生理盐水两组Ct值无明显差异.结论 菌量为103～106 CFU/mL时,通过10 μg/mLEMA作用,EMA处理过样品与未加EMA处理样品的ACt值≥1,可考虑样品中沙门菌活菌比例≤50％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鞠长燕		25	98	6.0	8.0
2	段永翔		45	267	9.0	14.0
3	顾一心	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	9	14	2.0	3.0
4	张茂俊	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	19	73	4.0	8.0
5	梁昊	中国疾病预防控制中心传染病预防控制所	3	0	0.0	0.0
6	马艳萍		3	4	1.0	2.0
7	闻子钰		1	0	0.0	0.0