锌指蛋白ZBTB20原核重组表达与纯化体系的优化

• 作者: 张海 章卫平 苏凯 谢志芳
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: ZBTB20 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 26-30,135
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 4268字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2020.07.007

摘要

目的 优化锌指蛋白ZBTB20的谷胱甘肽巯基转移酶(GST)融合蛋白表达体系和纯化条件,以获得足够的ZBTB20蛋白及其截短体的GST融合蛋白,为研究该蛋白的转录调控机制奠定基础.方法 将ZBTB20蛋白及其截短体的GST融合蛋白表达质粒转化大肠杆菌BL21并进行异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.通过SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色鉴定融合蛋白的表达量;对诱导表达的温度与时间、包涵体裂解液的配方和裂解方法以及纯化方法进行优化.结果 经SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色发现在37℃诱导条件下全长ZBTB20-GST蛋白主要以包涵体形式表达且不易溶于包涵体裂解液中.采用低温诱导可以提高包涵体中全长ZBTB20-GST融合蛋白的溶解性.改良的纯化方法能够将包涵体裂解上清中的全长ZBTB20-GST融合蛋白纯化下来.ZBTB20蛋白截短体的溶解性比全长蛋白好,且截短体越短溶解性越好.结论 优化后的融合蛋白诱导表达和纯化方法能够获得足够的ZBTB20蛋白及其截短体的GST融合蛋白用于后续研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章卫平	海军军医大学病理生理学教研室	7	4	1.0	1.0
2	苏凯	海军军医大学病理生理学教研室	2	1	1.0	1.0
3	谢志芳	海军军医大学病理生理学教研室	1	0	0.0	0.0
4	张海	海军军医大学病理生理学教研室	1	0	0.0	0.0