剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

• 作者: 周文钊 孙艺桓 张燕梅 李俊峰 杨倩 杨子平 鹿志伟
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 剑麻 AhKNOX2 酵母双杂交 cDNA文库 蛋白质相互作用
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 组学与生物技术
• 页码范围: 1748-1755
• 页数: 8页
• 分类号: S563.8|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.09.004

摘要

植物KNOX(Knotted1-like homeobox)可通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件.为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵筛选与之相互作用的蛋白.结果 表明:文库总容量为3.9×106 CFU,转化效率为9.15×105 CFU/μg pGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5～3.0 kb之间,重组率为92％,保存的文库细胞密度为1.35×108/mL,文库滴度为2.22×107 CFU/mL.构建的pGBKT7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5 mmol/L的3-氨基-1,2,4-三唑(3-Amino-1,2,4-triazole,3-AT)能抑制诱饵载体的自激活,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白.本研究成功构建剑麻叶片酵母表达文库,并筛选获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,该结果为进一步研究AhKNOX2在剑麻中的功能奠定前期基础,为培育高纤维产量的剑麻新品种提供基因资源和理论基础.