人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究

• 作者: 张春晨 胡双艳 阮海华
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 人源溶菌酶 大肠杆菌表达系统 包涵体 包涵体体外复性 溶壁微球菌
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 153-161
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0680

摘要

人源溶菌酶(Human lysozyme,HLZ)是一种糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作为抗生素的替代品,已经被广泛应用于食品业、畜牧业和医疗等领域.如何获得高产量、高活性、高纯度的人源溶菌酶一直是亟待解决的技术问题.优化人源溶菌酶编码基因密码子,提高其在大肠杆菌中的适应度和表达量;将优化的基因克隆至大肠杆菌表达质粒pET21a,并将其在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中诱导表达;利用8 mol/L尿素溶液对包涵体进行溶解变性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式以及复性液中谷胱甘肽氧化还原对(GSSG/GSH)、精氨酸、甘油等复性物的浓度对重组人源溶菌酶复性的效果,获得最佳的复性方案.研究结果表明:37℃诱导温度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功诱导了分子量约为14.7 kD的重组人源溶菌酶的表达,包涵体表达量约为380 mg/L(湿重).包涵体经一步透析、梯度透析和梯度稀释3种复性方式复性后,测得比活力值分别为147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳复性方法为梯度透析复性法.进一步探索了复性液中GSSG/GSH比值、精氨酸浓度、甘油浓度对人源溶菌酶复性效果的影响,表明当复性液中同时添加浓度比为1:2的GSSG/GSH、4 mmol/L精氨酸和6％ 甘油时,复性后人源溶菌酶的最佳比活力值为1170 U/mg,显著高于3种复性物均不加时溶菌酶335 U/mg的比活力值,但低于溶菌酶标准品1732 U/mg的比活力值.成功地将人源溶菌酶基因在大肠杆菌中表达,并通过包涵体复性体系成功获得高活性重组人源溶菌酶.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮海华	天津商业大学生物技术与食品科学学院	14	30	4.0	5.0
2	胡双艳	天津商业大学生物技术与食品科学学院	4	4	1.0	2.0
3	张春晨	天津商业大学生物技术与食品科学学院	5	4	1.0	2.0